Kit RT-qPCR direto III
Descrição do kit:
◮O kit Direct RT-qPCR, usando Foreasy Reverse Transcriptase e Foreasy HS Taq DNA Polymerase desenvolvido pela Foregene, com tampão de reação exclusivo, torna este kit com forte resistência e compatibilidade, e pode testar diretamente a reação usando o sistema Foregene Lysis como modelo.Este kit pode ser aplicado ao kit de detecção de ácido nucleico COVID-19 e ao desenvolvimento do kit de detecção de ácido nucleico de outras bactérias patogênicas.
Descrição
O kit Direct RT-qPCR fornece tampão RT-qPCR embalado separadamente (com Foreasy HS Taq DNA polimerase misturado) e alta eficiênciaForeasy transcriptase reversa (MMLV),tornando-o conveniente para a criação de kits de back-end e ajuste do sistema, dentro de uma verificação simples.
O kit Direct RT-qPCR, usando Foreasy Reverse Transcriptase e Foreasy HS Taq DNA Polymerase desenvolvido pela Foregene, com tampão de reação exclusivo, torna este kit com forte resistência e compatibilidade, e pode testar diretamente a reação usando o sistema Foregene Lysis como modelo.Este kit pode ser aplicado ao kit de detecção de ácido nucleico COVID-19 e ao desenvolvimento do kit de detecção de ácido nucleico de outras bactérias patogênicas.
Este kit pode ser diretamente o componente do produto IVD, usando de forma fácil e rápida.Só precisa de verificação fácil, sem desenvolver novamente.
Especificações
500T, 50.000T
Componentes do kit
| Conteúdo do kit (sistema de reação de 20 μL) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500T | 50.000 T | |
| Foreasy Rsempre transcriptase(200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 mL×5 |
| 2× qPCR diretoMix-Taqman | 1 mL × 5 | 500 ml×1 |
| Instrução | 1 | 1 |
Etapas operacionais
A: Prepare o molde e o reagente
1. Prepare o modelo de RNA preparado (recomenda-se usar o kit da série Foregene Total RNA Isolation Kit para extrair e purificar o modelo de RNA) ou produto de quebra de amostra (recomenda-se usar o sistema Foregene Lysis), primers específicos (10 μM) e outros consumíveis relevantes, instrumento.
2. Coloque o 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O e 20× ROX Reference Dye (se necessário) na caixa com gelo, fazendo com que derretam naturalmente, e misture delicadamente.
B: Preparação do sistema RT-qPCR
Obtenha metade do volume do tampão de reação do sistema de reação (por exemplo, se o volume do sistema for 20 μL, ele precisa obter 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer). Paraquantidade correspondente de enzima, sugerimos queM-MLV: sistema de reação de 10-30 U/20 μL,TaqDNA polimerase：Sistema de reação de 1-2 U/20 μLesta é a nossa sugestão, você deve testar e ajustar), adicionar modelo de RNA, primers e sondas específicos e adicionar RNase-Free ddH2O a 20 μL.A preparação específica do sistema de reação RT-qPCR pode ser consultada na tabela 1 a seguir.
Tabela 1: Preparação do sistema RT-qPCR
| Componente | Volume | concentração final |
| 2× Buffer RT-qPCR Direto | 10 μL | 1× |
| Foreasy transcriptase reversa (MMLV) | 10-30U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase | 1-2 U | |
| Primer direto (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Primer reverso (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Sonda (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Modelo (RNA ou lisado) | X μL | |
| Corante de referência 20× ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Volume total | 20 μL |
Nota: Forward Primer e Reverse Primer são primers específicos do gene alvo.O sistema do qPCR pode ser ajustado de acordo com modelos práticos experimentais e de PCR.Recomendamos 400nM para a concentração final da maioria dos primers.Ajuste o volume de primers e sondas específicos de acordo com a concentração preparada e a concentração final recomendada, por favor.
1*: Selecione a concentração final adequada de ROX Reference Dye de acordo com diferentes instrumentos quantitativos de PCR.A concentração ideal de ROX Reference Dye de instrumentos de PCR quantitativos comuns é mostrada na tabela a seguir:
| Instrumentos de PCR quantitativos | Concentração final do Corante de Referência ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Etapa Um,etc. | 1× (por exemplo, adicione 1μl 20×ROX Reference Dye em 20 μL do sistema de reação) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P e Mx4000, etc. | 0,5× (por exemplo, adicione 0,5μl 20×ROX Reference Dye em 20 μL do sistema de reação) |
| Instrumento de PCR Roche, instrumento de PCR Bio-Rad, instrumento de PCR quantitativo Eppendorf, etc. | Sem corante de referência ROX |
Armazenamento e prazo de validade
O kit deve ser armazenado a -20 ± 5 ℃.Deve ser imediatamente armazenado em refrigerador termostático -20℃.O período de validade é de 2 anos se for armazenado em condições adequadas.
