Kit qPCR Cell Direct RT - SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready Kits qRT-PCR de uma etapa
Descrições
Este kit usa um sistema de tampão de lise exclusivo que pode liberar rapidamente o RNA de amostras de células cultivadas para reações de RT-qPCR, eliminando assim o demorado e trabalhoso processo de purificação de RNA.O modelo de RNA pode ser obtido em apenas 7 minutos.os 5×Mixagem direta de RT e 2×Os reagentes Direct qPCR Mix-SYBR fornecidos pelo kit podem obter resultados de PCR quantitativos em tempo real de forma rápida e eficaz.
5×Mixagem direta de RT e 2×O qPCR direto Mix-SYBR tem forte tolerância ao inibidor, e o lisado das amostras pode ser usado como modelo para RT-qPCR diretamente.Este kit contém a exclusiva transcriptase reversa Foregene de alta afinidade de RNA e polimerase de DNA Hot D-Taq, dNTPs, MgCl2, tampão de reação, otimizador e estabilizador de PCR.
Especificações
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Componentes do kit
| Parte I | Tampão CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| parte II | Apagador de DNA |
| 5× Mix RT Direto | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| Corante de referência 50× ROX | |
| DdH2O livre de RNase | |
| Instruções | |
Características&vantagens
■Simples e eficaz: com a tecnologia Cell Direct RT, amostras de RNA podem ser obtidas em apenas 7 minutos.
■ A demanda de amostra é pequena, apenas 10 células podem ser testadas.
■ Alto rendimento: pode detectar rapidamente o RNA em células cultivadas em placas de 384, 96, 24, 12, 6 poços.
■ O DNA Eraser pode remover rapidamente os genomas liberados, reduzindo bastante o impacto nos resultados experimentais subseqüentes.
■ O sistema otimizado de RT e qPCR torna a transcrição reversa de RT-PCR de duas etapas mais eficiente e a PCR mais específica e mais resistente aos inibidores da reação de RT-qPCR.
Kit de aplicação
Âmbito de aplicação: células cultivadas.
- ARN libertado por lise da amostra: aplicável apenas ao modelo RT-qPCR deste kit.
- O kit pode ser utilizado para as seguintes finalidades: análise de expressão gênica, verificação do efeito de silenciamento gênico mediado por siRNA, triagem de drogas, etc.
Diagrama
Armazenamento e prazo de validade
A parte I deste kit deve ser armazenada a 4℃;A Parte II deve ser armazenada a -20℃.
Foregene Protease Plus II deve ser armazenado a 4℃, não congele a -20 ℃.
Reagente 2×O qPCR direto Mix-SYBR deve ser armazenado em -20℃no escuro;se usado com frequência, também pode ser armazenado em 4℃ para armazenamento de curto prazo (use em 10 dias).
Princípios de design de primers de PCR em tempo real
Forward Primer e Reverse Primer
Para PCR em tempo real, o design do primer é muito importante.Os primers estão relacionados à especificidade e eficiência da amplificação por PCR e podem ser projetados com referência aos seguintes princípios:
Comprimento do primer: 18-30bp.
Conteúdo de GC: 40-60%.
Valor Tm: O software de design do primer, como o Primer 5, pode fornecer o valor Tm do primer.Os valores de Tm dos primers upstream e downstream devem ser os mais próximos possíveis.A fórmula de cálculo Tm também pode ser usada: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ao realizar PCR, uma temperatura abaixo do valor Tm do primer de 5 °C é geralmente selecionada como a temperatura de anelamento (o aumento correspondente na temperatura de anelamento pode aumentar a especificidade da reação de PCR).
Primers e produtos de PCR:
O comprimento do produto de amplificação por PCR do primer de design é de preferência 100-150bp.
Os primers de design na área estrutural secundária do gabarito devem ser evitados tanto quanto possível.
Evite a formação de 2 ou mais bases complementares entre as extremidades 3' dos primers upstream e downstream.
A base terminal 3' do primer não pode estar presente com 3 G ou C consecutivos adicionais.
Os próprios primers não podem ter estruturas complementares, caso contrário, uma estrutura em grampo será formada, afetando a amplificação da PCR.
O ATCG deve ser distribuído o mais uniformemente possível na sequência do primer, e a base do terminal 3' deve ser evitada como T.
Apêndice 1: Pacote complementar de componentes do kit Cell Direct RT-qPCR
1.Solução de Lise Celular
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| Componentes do kit (sistema de lise de 24 poços/poço) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100T | 500T | ||
| PapelEU | Tampão CL | 20ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PapelII | Apagador de DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
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| Componentes do kit (sistema de reação de 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200T | |
| 5× Mix RT Direto | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml × 2 |
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| Componentes do kit (sistema de reação de 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200T | 1000T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| Corante de referência 50× ROX | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manual de instruções:
