(96 poços) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – Taqman
Descrições
O(96 poços) QuickEasyTM Kit Cell Direct RT-qPCR–taqmanforneceum sistema tampão de lise exclusivoto liberar rapidamente o RNAde células cultivadasamostras para reações de RT-qPCR, eliminando a demorada e trabalhosaProcesso de purificação de RNA e leva apenas 7 minutos para obter o modelo de RNA necessário.O5× Mix RT Diretoe2× Direct qPCR Mix-SYBRfornecido na caixa pode rapidamente eobter efetivamente dados quantitativos em tempo realresultados de PCR.
5× Direct RT Mix e 2× Direct qPCR Mix-Taqman têm forte tolerância a inibidores e podem usar o lisado da amostra a ser testada como modelo para transcrição reversa eficiente e amplificação específica.O reagente contém Transcriptase Reversa exclusiva da Foregene com alta afinidade para RNA, bem como Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , tampão de reação, otimizador e estabilizador de PCR, e pode ser usado em conjunto com o tampão de lise para detectar a amostra de forma rápida, fácil e precisa, e possui as características de alta sensibilidade, forte especificidade e boa estabilidade.
O kit destina-se à lise do microssistema de células cultivadas em 96 poços e apresenta boa uniformidade e consistência;os componentes do kit fornecem 96 reações de lise, 96 reações de transcrição reversa e 96 × 2 reações qPCR, que podem atender a placa de células de 96 poços para uso único, evitando a poluição causada pela abertura repetida, congelamento e descongelamento de reagentes e a degradação do desempenho do reagente.
Componentes do kit
| composição do kit ( 50 μL sistema de lise/20 μLRT sistema de reação /20μL sistema de reação qPCR) | DRT-03021 | Observação | |
| 96T | |||
| PapelI | AmortecedorCL | 5 mL | CélulaLise |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| AmortecedorST | 500 μL | ||
| Papel II | DNAApagador | 100 μL | |
| 5× Mix RT Direto | 400 μL | RT | |
| 2× Mistura direta de qPCR-Taqman | 1mL × 2 | qPCR | |
| Corante de referência 50× ROX | 400µL | ||
| RNase- LivreddH2 O | 1,7mL |
| |
| Manual anual | 1 pedaço | 1 porção | |
*: O reagente de lise DNA Eraser está incluído na Parte II do kit;Os componentes de lise celular, RT e qPCR podem ser adquiridos separadamente.
Características&vantagens
■Simples e eficaz: com a tecnologia Cell Direct RT, amostras de RNA podem ser obtidas em apenas 7 minutos.
■ A demanda de amostra é pequena, apenas 10 células podem ser testadas.
■ Alto rendimento: pode detectar rapidamente o RNA em células cultivadas em placas de 384, 96, 24, 12, 6 poços.
■ O DNA Eraser pode remover rapidamente os genomas liberados, reduzindo bastante o impacto nos resultados experimentais subseqüentes.
■ O sistema otimizado de RT e qPCR torna a transcrição reversa de RT-PCR de duas etapas mais eficiente e a PCR mais específica e mais resistente aos inibidores da reação de RT-qPCR.
Kit de aplicação
Âmbito de aplicação: células cultivadas.
- ARN libertado por lise da amostra: aplicável apenas ao modelo RT-qPCR deste kit.
- O kit pode ser utilizado para as seguintes finalidades: análise de expressão gênica, verificação do efeito de silenciamento gênico mediado por siRNA, triagem de drogas, etc.
Armazenamento e prazo de validade
A parte I deste kit deve ser armazenada a 4℃;A Parte II deve ser armazenada a -20℃.
Foregene Protease Plus II deve ser armazenado a 4℃, não congele a -20 ℃.
Reagente 2×O qPCR direto Mix-Taqman deve ser armazenado em -20℃no escuro;se usado com frequência, também pode ser armazenado em 4℃ para armazenamento de curto prazo (use em 10 dias).
Princípios de design de primers de PCR em tempo real
Forward Primer e Reverse Primer
Para PCR em tempo real, o design do primer é muito importante.Os primers estão relacionados à especificidade e eficiência da amplificação por PCR e podem ser projetados com referência aos seguintes princípios:
- Comprimento do primer: 18-30bp.
- Conteúdo de GC: 40-60%.
- Valor Tm: O software de design do primer, como o Primer 5, pode fornecer o valor Tm do primer.Os valores de Tm dos primers upstream e downstream devem ser os mais próximos possíveis.A fórmula de cálculo Tm também pode ser usada: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ao realizar PCR, uma temperatura abaixo do valor Tm do primer de 5 °C é geralmente selecionada como a temperatura de anelamento (o aumento correspondente na temperatura de anelamento pode aumentar a especificidade da reação de PCR).
- Primers e produtos de PCR:
- O comprimento do produto de amplificação por PCR do primer de design é de preferência 100-150bp.
- Os primers de design na área estrutural secundária do gabarito devem ser evitados tanto quanto possível.
- Evite a formação de 2 ou mais bases complementares entre as extremidades 3' dos primers upstream e downstream.
- A base terminal 3' do primer não pode estar presente com 3 G ou C consecutivos adicionais.
- Os próprios primers não podem ter estruturas complementares, caso contrário, uma estrutura em grampo será formada, afetando a amplificação da PCR.
- O ATCG deve ser distribuído o mais uniformemente possível na sequência do primer, e a base do terminal 3' deve ser evitada como T.
Apêndice1：Cell diretoRT-qPCR Kit de componentest pacote de suplemento
1.Solução de Lise Celular
| Solução de Lise Celular | |||
| Componentes do kit (sistema de lise de 24 poços/poço) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100T | 500T | ||
| PapelEU | Tampão CL | 20ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PapelII | Apagador de DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Componentes do kit (sistema de reação de 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200T | |
| 5× Mix RT Direto | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| mistura qPCR | ||
| Componentes do kit (sistema de reação de 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200T | 1000T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| Corante de referência 20× ROX | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manual de instruções:
