Kit de isolamento de DNA e RNA viral Kits de preparação para purificação de extração de DNA e RNA viral
Especificações
50 preparações, 200 preparações
O kit de isolamento de extração de purificação de ácido nucléico de RNA viral usa a coluna giratória e a fórmula desenvolvida pela Foregene, que pode extrair eficientemente RNA viral de alta pureza e qualidade de amostras como plasma, soro, fluido corporal livre de células e sobrenadante de cultura celular.O kit adiciona especificamente Acrilamida Linear, que pode facilmente capturar pequenas quantidades de RNA das amostras.A coluna somente RNA pode ligar eficientemente o RNA.O kit pode processar um grande número de amostras ao mesmo tempo.
Todo o kit não contém RNase, portanto o RNA purificado não será degradado.O tampão viRW1 e o tampão viRW2 podem garantir que o ácido nucleico viral obtido esteja livre de proteínas, nuclease ou outras impurezas, que podem ser usadas diretamente para experimentos de biologia molecular a jusante.
Componentes do kit
| Acrilamida Linear |
| Buffer DRL |
| Buffer RW1, Buffer RW2 |
| RNase-Free ddH2O |
| Coluna de DNA/RNA |
| Instruções |
Características&vantagens
■ Operação em temperatura ambiente (15-25℃) durante todo o processo, sem banho de gelo e centrifugação em baixa temperatura.
■ Kit completo RNase-Free, não precisa se preocupar com a degradação do RNA.
■ Alto rendimento de ácido nucléico: A coluna somente DNA/RNA e a fórmula exclusiva podem purificar DNA e RNA com eficiência.
■ Grande capacidade de processamento de amostras: amostras de até 200μl podem ser processadas de cada vez.
■ Velocidade rápida: fácil de operar e pode ser concluída em 20 minutos.
■ Segurança: nenhum reagente orgânico é necessário.
■ Alta qualidade: Os fragmentos de RNA purificados são de alta pureza, livres de proteínas e outras impurezas e podem atender a várias aplicações experimentais downstream.
Kit de aplicação
É adequado para a extração e purificação de ácido nucleico viral em amostras como plasma, soro, fluido corporal livre de células e sobrenadante de cultura celular.
fluxo de trabalho
Diagrama
Armazenamento e prazo de validade
■ Este kit pode ser armazenado por 24 meses em condições secas à temperatura ambiente (15-25℃);se precisar ser armazenado por mais tempo, pode ser armazenado em 2–8 ℃.
■ A solução de Acrilamida Linear pode ser armazenada em temperatura ambiente por 7 dias;depois de receber o kit, retire-o e guarde-o a -20°C.
■ Depois de adicionar Acrilamida Linear ao Tampão DRL, pode ser armazenado a 2-8°C até 48h.Por favor, use a solução pronta.
Guia de análise de problemas
O que se segue é uma análise dos problemas que podem ser encontrados na extração de DNA/RNA viral, na esperança de ser útil para seus experimentos.Além disso, para outros problemas experimentais ou técnicos além das instruções de operação e análise de problemas, temos suporte técnico dedicado para ajudá-lo.Se você tiver alguma necessidade, entre em contato conosco: 028-83360257 ou e-mail:
Tech@foregene.com.
Nenhuma extração de ácido nucleico ou baixo rendimento de ácido nucleico
Geralmente, existem muitos fatores que afetam a eficiência da recuperação, como: conteúdo de ácido nucleico da amostra, método de operação, volume de eluição, etc.
Análise das causas comuns:
1. Um banho de gelo ou centrifugação em baixa temperatura (4°C) foi realizado durante o procedimento.
Sugestão: Operar em temperatura ambiente (15-25°C) durante todo o processo, não banho de gelo e centrifugação em baixa temperatura.
2. A amostra foi armazenada incorretamente ou a amostra foi armazenada por muito tempo.
Recomendação: Armazenar as amostras a -80°C e evitar congelamentos e descongelamentos repetidos;tente usar amostras coletadas recentemente para extração de ácido nucleico.
3. Lise insuficiente da amostra.
Recomendação: Certifique-se de que a amostra e a solução de trabalho de lise são bem misturadas e incubadas à temperatura ambiente (15-25°C) durante 10 minutos.
4. Adição incorreta de eluente.
Sugestão: Certifique-se de que o ddH2O livre de RNase seja adicionado gota a gota no meio da membrana da coluna de purificação e não o deixe cair no anel da coluna de purificação.
5. O volume correto de etanol absoluto não foi adicionado ao Buffer RW2.
Sugestão: Siga as instruções, adicione o volume correto de etanol absoluto ao Buffer RW2 e misture bem antes de usar o kit.
6. Volume de amostra inadequado.
Sugestão: 200µl de amostra são processados para cada 500µl de Buffer DRL.O processamento excessivo da amostra resultará em menor rendimento de extração de ácido nucleico.
7. Volume de eluição inadequado ou eluição incompleta.
Recomendação: O volume do eluente da coluna de purificação é de 30-50μl;se o efeito de eluição não for satisfatório, recomenda-se estender o tempo à temperatura ambiente após adicionar ddH2O livre de RNase pré-aquecido, como 5-10min.
8. O etanol permanece na coluna após a lavagem com Buffer RW2.
Sugestão: Se o etanol permanecer após a centrifugação com Buffer RW2 por 2 minutos, a coluna pode ser colocada em temperatura ambiente por 5 minutos após a centrifugação para remover totalmente o etanol residual.
O ácido nucleico purificado é degradado
A qualidade do ácido nucléico purificado está relacionada à preservação da amostra, contaminação por RNase, operação e outros fatores.Análise das causas comuns:
1. As amostras coletadas não foram armazenadas a tempo.
Sugestão: Se a amostra não for utilizada a tempo após a coleta, armazene-a imediatamente a -80°C em baixa temperatura.Para extração de RNA, tente usar amostras recém-colhidas.
2. Colete amostras e congele e descongele repetidamente.
Sugestão: Evite congelar e descongelar (não mais de uma vez) durante a coleta e armazenamento das amostras, caso contrário o rendimento de ácido nucléico será reduzido.
3. A RNase é introduzida na sala de operação ou luvas descartáveis, máscaras, etc. não são usadas.
Recomendação: Os experimentos de extração de RNA são melhor realizados em uma sala de operação de RNA separada, e a mesa do laboratório deve ser limpa antes do experimento.
Use luvas e máscaras descartáveis durante o experimento para evitar a degradação do RNA causada pela introdução de RNase ao máximo.
4. O reagente foi contaminado com RNase durante o uso.
Recomendação: Substitua por um novo kit de isolamento de DNA/RNA viral para experimentos relacionados.
5. Os tubos de centrífuga e as pontas de pipetas usados para manipulação de RNA estão contaminados com RNase.
Sugestão: Certifique-se de que os tubos de centrífuga, pontas de pipetas, pipetas, etc. utilizados para extração de RNA sejam todos RNase-Free.
Ácido nucleico purificado afeta experimentos a jusante
DNA e RNA purificados pela coluna de purificação, se o íon sal e o teor de proteína forem muito altos, isso afetará os experimentos a jusante, como: amplificação por PCR, transcrição reversa, etc.
1. O DNA e o RNA eluídos possuem íons salinos residuais.
Sugestão: Certifique-se de que o volume correto de etanol absoluto seja adicionado ao Buffer RW2 e lave a coluna de purificação duas vezes na velocidade de centrifugação especificada nas instruções de operação;Realize a centrifugação para minimizar a contaminação de íons de sal.
2. O DNA e o RNA eluídos possuem resíduos de etanol.
Sugestão: Após confirmar a lavagem com Buffer RW2, realizar a centrifugação tubo vazio na velocidade de centrifugação indicada no manual de instruções;se ainda houver resíduo de etanol, você pode centrifugar o tubo vazio e colocá-lo em temperatura ambiente por 5 minutos para remover o resíduo de etanol ao máximo.
Manual de instruções:
Manual de instruções do kit de isolamento de DNA e RNA viral
