Guia de análise de problemas

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Baixo rendimento ou nenhum DNA

Geralmente, existem muitos fatores que afetam o rendimento do DNA genômico, incluindo a fonte da amostra, a idade da amostra, as condições de armazenamento da amostra e a operação.

O DNA genômico não pôde ser obtido durante a extração

1. As amostras de tecido são armazenadas de forma inadequada ou por muito tempo, resultando na degradação do DNA genômico.

Recomendação: Armazenar amostras de tecido em nitrogênio líquido ou -20°C;tente usar amostras recém coletadas para extração de DNA genômico.

2. Uma quantidade muito pequena de amostra pode fazer com que o DNA genômico correspondente não seja extraído.

Sugestão: Para amostras de tecido que foram armazenadas por um longo período de tempo ou que apresentam degradação severa do DNA genômico, a quantidade de amostras de tecido pode ser adequadamente aumentada para extrair DNA genômico considerável.A quantidade da amostra pode ser determinada de acordo com as necessidades de DNA, mas a amostra fresca não deve exceder 100 mg e a amostra seca não deve exceder 30 mg.

3. A amostra não é moída com nitrogênio líquido ou colocada por muito tempo após o nitrogênio líquido.

Sugestão: Durante a extração do DNA, a amostra precisa ser totalmente triturada com nitrogênio líquido para quebrar a parede celular;após a moagem, transfira o pó da amostra para PL1 pré-aquecido a 65°C o mais rápido possível (assim que o pó moído for derretido, o DNA genômico começará a se degradar rapidamente).

4. O armazenamento inadequado de Foregene Protease resulta em atividade reduzida ou inativada.

Recomendação: Confirmar as condições de armazenamento do Foregene Protease ou substituí-lo por um novo Foregene Protease para hidrólise enzimática.

5. O kit é armazenado incorretamente ou armazenado por muito tempo, fazendo com que alguns componentes do kit falhem.

Recomendação: Adquira um novo kit de extração de DNA genômico de plantas para operações relacionadas.

6. Uso inadequado do kit.

Sugestão: Adquira um Kit de Isolamento de DNA Vegetal dedicado a amostras para extração e purificação de DNA genômico vegetal.

7. Buffer WB sem adicionar umnítrico etanol.

Recomendação: Certifique-se de adicionar o volume correto de etanol absoluto ao Buffer WB.

8. O eluente não foi pingado corretamente na membrana de sílica.

Sugestão: Adicionar o eluente pré-aquecido a 65℃gota a gota no meio da membrana de sílica gel e deixe em temperatura ambiente por 5 minutos para aumentar a eficiência da eluição.

Extração para obter DNA genômico de baixo rendimento

1. A amostra é armazenada incorretamente ou armazenada por muito tempo, resultando na degradação do DNA genômico.

Recomendação: Armazenar amostras de tecido a -20℃;tente usar amostras de tecido recém coletadas para extração de DNA genômico.

2. Se a quantidade de amostras de tecido for muito pequena, o DNA genômico extraído será menor.

Sugestão: Algumas amostras de plantas são ricas em água, como plantas aquáticas como algas, etc., a dosagem pode ser aumentada adequadamente ou a água pode ser desidratada um pouco antes da operação.

3. As amostras não foram totalmente moídas com nitrogênio líquido ou foram deixadas em temperatura ambiente por muito tempo após a trituração.

Sugestão: A moagem do nitrogênio líquido deve ser suficiente, e a parede da célula de amostra deve ser quebrada o máximo possível;imediatamente após a moagem, o pó da amostra deve ser transferido para 65℃Buffer pré-aquecido PL1 para a próxima etapa.

4. Não usar o kit correto.

Recomendação: Use um kit de isolamento de DNA vegetal dedicado para extrair e purificar o DNA genômico vegetal.

5. O armazenamento inadequado de Foregene Protease resulta em atividade reduzida ou inativada.

Recomendação: Confirmar as condições de armazenamento do Foregene Protease ou substituí-lo por um novo Foregene Protease para hidrólise enzimática.

6. Problema do eluente

Recomendação: Use Buffer EB para eluição;se estiver usando ddH₂O ou outros eluentes, certifique-se de que o pH do eluente esteja entre 7,0-8,5.

7. O eluente não foi gotejado corretamente

Sugestão: Adicione a gota de eluição no meio da membrana de sílica e deixe-a em temperatura ambiente por 5 minutos para aumentar a eficiência da eluição.

8. O volume do eluente é muito pequeno

Sugestão: Por favor, use o eluente para eluição do DNA genômico de acordo com as instruções, pelo menos não menos que 100μl.

DNA genômico extraído com baixa pureza

A baixa pureza do DNA genômico levará ao fracasso ou efeito ruim de experimentos a jusante, como: a enzima não pode ser cortada e o fragmento do gene alvo não pode ser obtido por PCR.

1. Contaminação protéica diversa, contaminação por RNA.

Análise: Buffer PW não foi usado para lavar a coluna;O tampão PW não foi usado para lavar a coluna na velocidade correta de centrifugação.

Sugestão: procure garantir que não haja precipitação no sobrenadante quando o sobrenadante for passado pela coluna;certifique-se de lavar a coluna de purificação com Buffer PW de acordo com as instruções, e esta etapa não pode ser omitida.

2. Poluição iônica impureza.

Análise: A coluna de lavagem Buffer WB foi omitida ou lavada apenas uma vez, resultando em contaminação iônica residual.

Recomendação: Certifique-se de lavar duas vezes com Buffer WB de acordo com as instruções para remover o máximo possível de íons residuais.

3. Contaminação por RNase.

Análise: A RNase exógena é adicionada ao Tampão;a operação de lavagem incorreta no Buffer PW resultará em RNase residual e afetará as operações experimentais de RNA a jusante, como a transcrição in vitro.

Sugestão: Os kits de extração de ácido nucleico da série Foregene podem remover o RNA sem RNase adicional, e todos os reagentes no kit de isolamento de DNA vegetal não precisam de RNase;certifique-se de lavar a coluna de purificação com Buffer PW de acordo com as instruções, e esta etapa não pode ser omitida.

4. Resíduos de etanol.

Análise: Após a lavagem da coluna de purificação com Buffer WB, nenhuma centrifugação em tubo vazio foi realizada.

Recomendação: Siga as instruções para centrifugação adequada do tubo vazio.

Manual de instruções:

Manual de instruções do kit de isolamento de DNA vegetal