Sem sinais de amplificação

1.A Taq DNA Polymerase no kit perde sua atividade devido ao armazenamento inadequado ou expiração do kit.
Recomendação: Confirmar as condições de armazenamento do kit;adicione novamente uma quantidade apropriada de Taq DNA Polimerase ao sistema de PCR ou adquira um novo kit de PCR em tempo real para experimentos relacionados.

2.Existem muitos inibidores da Taq DNA Polimerase no modelo de DNA.
Sugestão: Repurifique o molde ou reduza a quantidade de molde utilizado.

3.A concentração de Mg2+ não é adequada.
Recomendação: A concentração de Mg2+ do 2× Real PCR Mix que fornecemos é de 3,5 mM.No entanto, para alguns primers e modelos especiais, a concentração de Mg2+ pode ser maior.Portanto, você pode adicionar MgCl2 diretamente para otimizar a concentração de Mg2+.Recomenda-se aumentar o Mg2+ 0,5mM a cada vez para otimização.

4.As condições de amplificação por PCR não são adequadas e a sequência ou concentração do primer é inadequada.
Sugestão: confirme se a sequência do primer está correta e se o primer não foi degradado;se o sinal de amplificação não for bom, tente diminuir a temperatura de recozimento e ajuste a concentração do primer adequadamente.

5.A quantidade de modelo é muito pouco ou muito.
Recomendação: Execute a diluição do gradiente de linearização do modelo e selecione a concentração do modelo com o melhor efeito de PCR para o experimento de PCR em tempo real.

NTC tem valor de fluorescência muito alto

1. Contaminação do reagente causada durante a operação.
Recomendação: Substituir por novos reagentes para experimentos de PCR em tempo real.

2. Ocorreu contaminação durante a preparação do sistema de reação de PCR.
Recomendação: Tome as medidas de proteção necessárias durante a operação, como: usar luvas de látex, usar uma ponteira com filtro, etc.

3. Os primers são degradados e a degradação dos primers causará amplificação não específica.
Sugestão: Use a eletroforese SDS-PAGE para detectar se os primers estão degradados e substitua-os por novos primers para experimentos de PCR em tempo real.

Dímero de primer ou amplificação não específica

1.A concentração de Mg2+ não é adequada.
Recomendação: A concentração de Mg2+ do 2× Real PCR EasyTM Mix que fornecemos é de 3,5 mM.No entanto, para alguns primers e modelos especiais, a concentração de Mg2+ pode ser maior.Portanto, você pode adicionar MgCl2 diretamente para otimizar a concentração de Mg2+.Recomenda-se aumentar o Mg2+ 0,5mM a cada vez para otimização.

2. A temperatura de recozimento do PCR é muito baixa.
Sugestão: Aumente a temperatura de recozimento do PCR em 1℃ ou 2℃ de cada vez.

3. O produto de PCR é muito longo.
Recomendação: O comprimento do produto de PCR em tempo real deve estar entre 100-150bp, não mais que 500bp.

4.Os primers são degradados e a degradação dos primers levará ao aparecimento de amplificação específica.
Sugestão: Use a eletroforese SDS-PAGE para detectar se os primers estão degradados e substitua-os por novos primers para experimentos de PCR em tempo real.

5. O sistema de PCR é inadequado ou o sistema é muito pequeno.
Sugestão: O sistema de reação de PCR é muito pequeno fará com que a precisão da detecção diminua.É melhor usar o sistema de reação recomendado pelo instrumento de PCR quantitativo para executar novamente o experimento de PCR em tempo real.

Fraca repetibilidade de valores quantitativos

1.O instrumento está com defeito.
Sugestão: Pode haver erros entre cada orifício de PCR do instrumento, resultando em baixa reprodutibilidade durante o gerenciamento de temperatura ou detecção.Verifique de acordo com as instruções do instrumento correspondente.

2.A pureza da amostra não é boa.
Recomendação: Amostras impuras levarão a uma baixa reprodutibilidade do experimento, que inclui a pureza do modelo e dos primers.É melhor repurificar o modelo, e os primers são melhor purificados por SDS-PAGE.

3.O tempo de preparação e armazenamento do sistema de PCR é muito longo.
Sugestão: Use o sistema Real Time PCR para experimento de PCR imediatamente após a preparação, e não deixe-o de lado por muito tempo.

4.As condições de amplificação por PCR não são adequadas e a sequência ou concentração do primer é inadequada.
Sugestão: confirme se a sequência do primer está correta e se o primer não foi degradado;se o sinal de amplificação não for bom, tente diminuir a temperatura de recozimento e ajuste a concentração do primer adequadamente.

5. O sistema de PCR é inadequado ou o sistema é muito pequeno.
Sugestão: O sistema de reação de PCR é muito pequeno fará com que a precisão da detecção diminua.É melhor usar o sistema de reação recomendado pelo instrumento de PCR quantitativo para executar novamente o experimento de PCR em tempo real.