Swab bucal/cartão FTA Kit de isolamento de DNA Kit de extração ou purificação de DNA genômico de swabs bucais
Descrição do kit:
Purifique rapidamente o DNA genômico de alta qualidade de amostras de swab bucal/cartão FTA.
◮Sem contaminação por RNase:A coluna DNA-Only fornecida pelo kit permite retirar o RNA do DNA genômico sem adicionar RNase durante o experimento, evitando que o laboratório seja contaminado por RNase exógena.
◮Velocidade rapida:Foregene Protease tem maior atividade do que proteases semelhantes e digere amostras de tecido rapidamente;a operação é simples e a operação de extração de DNA genômico pode ser concluída em 20 a 80 minutos.
◮Conveniente:A centrifugação é realizada à temperatura ambiente e não há necessidade de centrifugação a baixa temperatura de 4°C ou precipitação do DNA com etanol.
◮Segurança:Nenhuma extração de reagente orgânico é necessária.
◮Alta qualidade:O DNA genômico extraído possui fragmentos grandes, sem RNA, sem RNase e conteúdo de íons extremamente baixo, que pode atender aos requisitos de vários experimentos.
◮Sistema de microeluição:Pode aumentar a concentração de DNA genômico, o que é conveniente para detecção ou experimento a jusante.
Descrição
Este kit fornece um método eficiente e rápido para obter DNA genômico de alta concentração a partir de zaragatoas bucais e FTA Card (manchas de sangue).Usando nossa empresa'Com a fórmula e a coluna giratória de membrana de sílica exclusiva de DNA, combinada com Foregene Protease, DNA genômico de alta concentração e alta qualidade pode ser extraído em 80 minutos.A pequena coluna de purificação especialmente projetada liga o DNA genômico e o DNA pode ser eluído com uma pequena quantidade (15μl) sistema de eluição para aumentar a concentração do DNA genômico obtido, o que é conveniente para detecção ou experimento a jusante.O kit pode processar uma ou mais amostras por vez, e o processo de purificação não requer extração de substâncias orgânicas, como fenol, clorofórmio e precipitação demorada de isopropanol ou etanol, e a operação é simples e economiza tempo.
Especificações
50 preparações
Componentes do kit
| Buffer ST1 |
| Tampão ST2 |
| Acrilamida Linear |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Tampão EB |
| Foregene Protease |
| Coluna somente de DNA |
| Instruções |
Características&vantagens
-Sem contaminação por RNase: A coluna DNA-Only fornecida pelo kit permite remover o RNA do DNA genômico sem adicionar RNase durante o experimento, evitando que o laboratório seja contaminado por RNase exógena.
-Velocidade rápida: Foregene Protease tem maior atividade do que proteases similares, digere amostras rapidamente;operação simples.
-Conveniente: A centrifugação é realizada à temperatura ambiente, e não há necessidade de centrifugação de baixa temperatura de 4 ° C ou precipitação de etanol de DNA.
-Segurança: Nenhuma extração de reagente orgânico é necessária.
-Alta qualidade: O DNA genômico extraído possui grandes fragmentos, sem RNA, sem RNase e teor de íons extremamente baixo, que pode atender aos requisitos de vários experimentos.
-Sistema de microeluição: pode aumentar a concentração de DNA genômico, o que é conveniente para detecção ou experimento a jusante.
Kit de aplicação
É adequado para purificação de DNA genômico das seguintes amostras: zaragatoas bucais, FTA Card (manchas de sangue).
Armazenamento e prazo de validade
-Este kit pode ser armazenado por 12 meses em local seco e em temperatura ambiente (15-25°C);se precisar ser armazenado por um longo período de tempo, pode ser armazenado a 2-8°C.
Observação: Se armazenada em baixa temperatura, a solução é propensa a precipitação.Antes de usar, certifique-se de colocar a solução no kit em temperatura ambiente por um período de tempo.Se necessário, pré-aqueça em banho-maria a 37°C por 10 minutos para dissolver o precipitado e misture antes de usar.
-A solução Foregene Protease possui uma fórmula única, que é ativa quando armazenada em temperatura ambiente por um longo período (3 meses);sua atividade e estabilidade serão melhores quando armazenado a 4°C, por isso é recomendável armazená-lo a 4°C, lembre-se de não mantê-lo a -20°C.
A coluna de purificação está entupida
Neste kit, na operação de extração de DNA genômico, a coluna de purificação é adsorvida diretamente na mistura de lise enzimática da amostra sem etapa de centrifugação, e a coluna de purificação pode ser bloqueada devido à enzimização incompleta e alta viscosidade da amostra.
As seguintes causas possíveis são as seguintes:
1. Digestão enzimática incompleta de amostras de tecido.
Recomendação: O tempo de processamento da amostra de Foregene Protease pode ser adequadamente estendido ou o sobrenadante pode ser coletado após centrifugação a 12.000 rpm (~13.400 × g) por 5 min.
2. Uso excessivo de amostras de tecido ou tecidos grandes.
Recomendação: É melhor não exceder 1 swab bucal na amostra;se a amostra for muito grande, aumente a dosagem de Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 de acordo.
3. A viscosidade da amostra é muito alta.
Recomendação: As amostras podem ser adequadamente diluídas com 10 mM de Tris-HCl antes da extração do DNA genômico.
4. Fragmentos do cartão de sangue foram sugados.
Recomendação: O tempo de centrifugação transiente da etapa 6 da extração genômica da mancha de sangue (Cartão FTA) pode ser adequadamente estendido.
Baixo rendimento ou nenhum DNA
Muitas vezes, há uma variedade de fatores que afetam o rendimento do DNA genômico, incluindo origem da amostra, condições de armazenamento da amostra, preparação da amostra, manipulação, etc.
O DNA genômico não pode ser obtido durante a extração
As possíveis causas são as seguintes:
1. A preservação inadequada das amostras ou o armazenamento por muito tempo leva à degradação do DNA genômico.
Recomendação: As zaragatoas orais devem ser preferencialmente colhidas recentemente e não é aconselhável a utilização de zaragatoas preservadas para operações de extração de ADN genómico;amostras de manchas de sangue devem garantir que a qualidade seja qualificada e o tempo de armazenamento não seja muito longo.
2. O uso insuficiente de tecido pode resultar na não extração do DNA genômico correspondente.
Recomendação: Siga as instruções de amostragem de swab bucal no guia de operação e limpe o máximo de vezes possível para que células suficientes possam ser anexadas ao swab oral para extração de DNA genômico;para extração de amostra de sangue, a área de corte do sangue pode ser aumentada adequadamente.
3. Foregene Protease é preservado de forma inadequada, resultando em uma diminuição em sua atividade ou inativação.
Recomendação: Confirmar as condições de armazenamento da Foregene Protease ou substituí-la por uma nova Foregene Protease para reação enzimática.
4. A preservação inadequada do kit ou o tempo de armazenamento é muito longo, resultando na falha de alguns componentes do kit.
Recomendação: Adquira um novo kit de isolamento de DNA de swab bucal para procedimentos relacionados.
5. Buffer WB não adiciona etanol absoluto.
Recomendação: Confirme se o tampão WB adiciona o volume correto de etanol absoluto.
6. O eluente não foi adicionado corretamente ao filme de silicone.
Recomendação: Adicione gotas de eluente pré-aquecido a 65 °C no meio da membrana de silicone e deixe em temperatura ambiente por 5 minutos para aumentar a eficiência da eluição.
DNA genômico de baixo rendimento isolado
As seguintes causas possíveis são as seguintes:
1. A preservação inadequada das amostras ou o armazenamento por muito tempo leva à degradação do DNA genômico.
Recomendação: As zaragatoas orais são preferencialmente colhidas recentemente e as zaragatoas preservadas não devem ser utilizadas para extração de ADN genómico.
2. Se a quantidade de amostra de tecido for muito pequena, o conteúdo de DNA genômico extraído será menor.
Recomendação: Siga as instruções de amostragem de swab oral no guia de operação, limpando o máximo de vezes possível para que células suficientes possam ser anexadas ao swab oral para extração de DNA genômico.
3. Foregene Protease é preservado de forma inadequada, resultando em uma diminuição em sua atividade ou inativação.
Recomendação: Confirmar as condições de armazenamento da Foregene Protease ou substituí-la por uma nova Foregene Protease para reação enzimática.
4. Problemas com eluentes.
Recomendação: Utilizar Buffer EB para eluição;se estiver usando ddH2O ou outros eluentes, confirme se o pH do eluato está entre 7,0-8,5.
5. O eluato não é adicionado gota a gota corretamente.
Recomendação: Adicione gotas de eluente no meio da membrana de silicone e deixe em temperatura ambiente por 5 min para aumentar a eficiência da eluição.
6. O líquido de eluição acumula muito pouco.
Recomendação: Use eluente para eluição de DNA genômico conforme exigido nas instruções, pelo menos não menos que 15 μl.
Baixa pureza do DNA genômico isolado
A baixa pureza do DNA genômico pode levar a falhas ou resultados insatisfatórios de experimentos downstream, como: as enzimas não podem ser cortadas, a PCR não pode obter o fragmento do gene de interesse, etc.
As possíveis causas são as seguintes:
1. Poluição por heteroproteína, poluição por RNA.
Análise: A coluna de purificação não foi lavada com Buffer PW;a coluna de purificação Buffer PW Wash não foi lavada usando a velocidade centrífuga correta.
Recomendação: Certifique-se de que não haja precipitação no sobrenadante antes de adicionar etanol;certifique-se de lavar a coluna de purificação de acordo com as instruções, e esta etapa não pode ser omitida.
2. Poluição iônica impureza.
Análise: A coluna de purificação de tampão WB foi omitida ou lavada apenas uma vez, resultando em contaminação iônica residual.
Recomendação: Certifique-se de lavar o Buffer WB 2 vezes conforme indicado para remover os íons residuais tanto quanto possível.
3. Contaminação enzimática de RNA.
Análise: RNases estrangeiras foram adicionadas ao tampão;A operação de lavagem do buffer PW estava incorreta, resultando em resíduos de RNase, afetando as operações experimentais de RNA a jusante, como a transcrição in vitro.
Recomendação: Os kits de isolamento de ácido nucleico da série Foregene podem remover o RNA sem adição adicional de RNase, portanto, o kit de isolamento de DNA de cartão FTA/Swab bucal não precisa adicionar RNase;certifique-se de seguir as instruções para a coluna de purificação de lavagem Buffer PW, e esta etapa não pode ser omitida.
4. Resíduo de etanol.
Análise: Buffer WB não realizou centrifugação em tubo vazio após a lavagem da coluna de purificação.
Recomendação: Execute a operação correta de centrifugação do tubo vazio de acordo com as instruções.
5. Outra poluição impureza.
Análise: Amostras salvas ou amostras especiais não são pré-tratadas.
Recomendação: Pré-trate completamente a amostra conforme as instruções.
