Guias para análise de problemas

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Nenhum RNA pode ser extraído ou o rendimento do ácido nucleico é baixo

Geralmente, existem muitos fatores que afetam a eficiência da recuperação, como: conteúdo de RNA da amostra, método de operação, volume de eluição, etc.。

Análise de causas comuns:

1. Banho de gelo ou centrifugação a baixa temperatura (4 ° C) durante a operação.

Sugestão: Operação em temperatura ambiente (15-25°C), nunca banho de gelo e centrifugação em baixa temperatura.

2. Armazenamento inadequado de amostras ou armazenamento de amostras por muito tempo.

Sugestão: Conservar as amostras a -80°C ou congelar em nitrogênio líquido, evitando o uso repetido de congelamento-descongelamento;tente usar amostras recém-colhidas para extração de RNA.

3. Lise de amostra insuficiente

Recomendação: Certifique-se de que a amostra e a solução de trabalho (Acrilamida Linear) foram bem misturadas e incubadas por 10 min em temperatura ambiente (15-25 ° C)

4. O eluente foi adicionado incorretamente

Recomendação: Certifique-se de que o ddH2O livre de RNase seja adicionado no meio da membrana da coluna de purificação

5.Volume impróprio de etanol anidro em Tampão viRW2

Sugestão: Siga as instruções, adicione o volume correto de etanol anidro ao Buffer viRW2 e misture bem antes de usar o kit。

6.Uso de amostra impróprio.

Sugestão: 200µl de amostra por 500µl de Tampão viRL.Volume de amostra excessivo resultará em taxa de extração de RNA reduzida.

7.Volume de eluição inadequado ou eluição incompleta.

Sugestão: O volume do eluente da coluna de purificação é de 30-50μl;se o efeito de eluição não for satisfatório, recomenda-se adicionar ddH livre de RNase pré-aquecido₂O e estender o tempo de colocação à temperatura ambiente, como 5-10min

8. A coluna de purificação contém resíduos de etanol após a lavagem em Tampão viRW2.

Sugestão: Se o etanol ainda permanecer após a lavagem em Tampão viRW2 e centrifugação em tubo vazio por 2min, a coluna de purificação pode ser deixada em temperatura ambiente por 5min após a centrifugação em tubo vazio para remover totalmente o etanol restante.

A degradação de moléculas de RNA purificadas

A qualidade do RNA purificado está relacionada a fatores como armazenamento da amostra, contaminação por RNase e operação.

Análise de causas comuns:

1.As amostras coletadas não foram salvas a tempo.

Sugestão: Se a amostra não for usada a tempo após a coleta, armazene-a a -80 ℃ ou nitrogênio líquido imediatamente.Para a extração de moléculas de RNA, tente usar amostras recém-colhidas sempre que possível.

2.As amostras coletadas congelavam e descongelavam repetidamente.

Sugestão: Evite congelamentos e descongelamentos repetidos (não mais de uma vez) durante a coleta e armazenamento da amostra, caso contrário, o rendimento do ácido nucléico diminuirá.

3. RNase foi introduzida na sala de cirurgia ou não foram usadas luvas descartáveis, máscaras, etc.

Sugestão: O experimento de extração de moléculas de RNA é melhor realizado em uma sala de operação de RNA separada, e a mesa experimental é limpa antes do experimento.Use luvas e máscaras descartáveis ​​durante o experimento para evitar a degradação do RNA causada pela introdução de RNase.

4.O reagente é contaminado por RNase durante o uso.

Sugestão: Substitua por um novo kit de isolamento de RNA viral para experimentos relacionados.

5. A contaminação por RNase dos tubos de centrífuga, ponteiras de pipetas, etc. Sugestão: Certifique-se de que os tubos de centrífuga, ponteiras de pipetas e pipetas estejam livres de RNase.

As moléculas de RNA purificadas afetaram os experimentos a jusante

As moléculas de RNA purificadas pela coluna de purificação afetarão os experimentos a jusante se houver muitos íons salinos ou proteínas, como: transcrição reversa, Northern Blot, etc.。

1.Existem íons salinos remanescentes nas moléculas de RNA eluídas.

Recomendação: Certifique-se de que o volume correto de etanol anidro foi adicionado ao tampão viRW2 e lave a coluna de purificação duas vezes de acordo com a velocidade de centrifugação correta nas instruções de operação; Se ainda houver íons salinos restantes, você pode adicionar tampão viRW2 à coluna de purificação e deixá-la em temperatura ambiente por 5 minutos.Em seguida, realize a centrifugação para remover a contaminação de íons de sal ao máximo

2. Há etanol remanescente nas moléculas de RNA eluídas

Sugestão: uma vez confirmado que as colunas de purificação foram enxaguadas pelo Buffer viRW2, realize a centrifugação em tubo vazio de acordo com a velocidade de centrifugação nas instruções de operação.Se ainda houver etanol restante, ele pode ser deixado por 5 minutos em temperatura ambiente após uma centrifugação em tubo vazio para remover o etanol restante ao máximo.

Manual de instruções:

Manual de instruções do kit de isolamento de RNA viral