Os métodos de PCR e a contaminação por aerossol de ácido nucleico em laboratórios de teste de ácido nucleico são como os dois lados de uma moeda.Só podemos escolher tê-lo ou não, mas não podemos escolher se queremos ou gastamos.

1. Triagem do removedor de DNA

Para conseguir a remoção espacial da contaminação por aerossóis de ácidos nucleicos, primeiro é necessário selecionar removedores de DNA que possam remover ácidos nucleicos em estado líquido.Porque não existem muitos removedores de DNA que realmente funcionem.Para o método experimental, consulte: O removedor de DNA não pode ser um "canto secreto" do laboratório!

Neste experimento, 100 cópias/μL (CT aproximadamente 31) de plasmídeo ASFV e removedor de DNA quantificado por PCR digital foram misturados em volumes iguais e então reagidos à temperatura ambiente por 10min, 20min e 30min, respectivamente.Após a extração do ácido nucleico, foi realizada a amplificação por qPCR.Um controle positivo misturado com plasmídeo e água foi comparado.Como o experimento não foi concluído ao mesmo tempo, pode haver um certo desvio entre os resultados, mas isso não afeta a conclusão do experimento.Até agora, avaliei 10 produtos comerciais de remoção de DNA.Somente os produtos Nº 1, Nº 6 e Nº 8 podem efetivamente degradar o DNA plasmidial em estado líquido.Outros produtos quase não têm efeito.

Tabela 1 Efeito de remoção de ácido nucleico do removedor de DNA disponível comercialmente

2. O experimento do efeito de remoção de DNA de desinfetantes comumente usados

1. Triagem de desinfetantes comumente usados

Existem muitos tipos de desinfetantes comumente usados ​​em laboratórios: aldeídos, fenóis, álcoois, sais de amônio quaternário, peróxidos, preparações de cloro e ácidos e bases.Os efeitos de desinfecção desses desinfetantes em microorganismos foram totalmente verificados por experimentos, mas não há dados experimentais suficientes sobre o efeito de degradação dos ácidos nucléicos.Os laboratórios de teste de ácido nucleico precisam de um desinfetante que não apenas tenha um bom efeito de desinfecção nos microorganismos, mas também possa degradar o DNA.Os resultados do teste mostram que apenas duas preparações de cloro de desinfetante 84 e ácido tricloroisocianúrico e ácido clorídrico 1 M atendem aos requisitos.Como o ácido clorídrico 1 M é altamente corrosivo, recomenda-se que as preparações de cloro sejam usadas como descarte de resíduos em laboratórios de teste de ácido nucleico.No entanto, as preparações de cloro são corrosivas para os metais e não podem ser usadas para desinfecção de instrumentos e equipamentos.

Tabela 2 Efeitos de remoção de DNA de diferentes tipos de desinfetantes

2. A concentração efetiva mínima de preparações de cloro

Os desinfetantes à base de cloro têm um forte efeito de degradação do DNA, mas devido à corrosão e irritação do metal, podem ser usados ​​para limpar o chão, bancadas não metálicas, pontas de imersão, tubos de centrífuga e outros itens de teste.

De acordo com as "Novas Diretrizes Técnicas de Desinfecção de Epidemias de Pneumonia Coronariana": Poluentes (sangue, secreções e vômitos de pacientes) cloro disponível 5g/L-10g/L desinfetante contendo cloro;pisos, paredes e superfícies de objetos use cloro disponível 1g/L Desinfetante de cloro: roupas, roupas de cama e outros tecidos são primeiro embebidos em desinfetante de cloro com 0,5g/L de cloro disponível por 30 minutos e depois limpos como de costume.

Tabela 3 Efeito de remoção de DNA de diferentes concentrações de desinfetante de cloro

Os resultados do teste mostram que: quando a concentração efetiva de cloro é maior ou igual a 1,2 g/L, o desinfetante contendo cloro pode degradar completamente 100 cópias/μL de plasmídeo quando usado por 5 minutos.Ao agir por 10 minutos, o desinfetante 84 com concentração efetiva de cloro maior ou igual a 0,6 g/L pode degradar completamente 100 cópias/μL de plasmídeos.

3. Experimento de remoção de ar poluído por aerossol de ácido nucleico

Como limpar o ar poluído por aerossóis de ácido nucleico?A maioria dos pensamentos é criar um ambiente contaminado por aerossol e depois limpá-lo ou limpar os ácidos nucléicos após a contaminação.Para mim, um experimento que não pode ser repetido e os resultados do experimento não podem ser analisados ​​​​quantitativamente não tem sentido, então peguei emprestados alguns métodos de desinfecção desinfetante do ar.Consulte "GB27948-2020 Requisitos gerais para desinfetantes de ar" e "Especificações técnicas de desinfecção"

1. Materiais de teste

1.1 Removedor de DNA: Neste experimento, dois removedores de DNA disponíveis comercialmente 6 e 8 na Tabela 1 foram selecionados.

1.2 Plasmídeo de teste: Considerando que o valor de CT da maior parte da poluição laboratorial será superior a 30, a concentração do plasmídeo do gene ASFV usado desta vez é de cerca de 100 cópias/μL, e o PCR quantitativo fluorescente CT é de cerca de 31,07.Adicione o plasmídeo ao cotonete flocado e seque ao ar.

1.3 Instrumento de teste: O instrumento de desinfecção Bilingkehan KVBOX, gentilmente apoiado pela Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., tem excelente desempenho de desinfecção do ar com desinfetante de peróxido de hidrogênio e pode efetivamente matar esporos e outros microorganismos.

1.4 Espaço de teste: uma janela de transferência fechada de cerca de 0,1 metros cúbicos.

2. Método de teste

A quantidade de desinfetante definida na máquina de desinfecção é de 10 ml e a concentração é de 100 ml/m3, muito maior do que "Requisitos gerais GB27948-2020 para desinfetantes de ar": ao usar a desinfecção por aerossol, a quantidade de desinfetante deve ser ≤10 ml/m3