Os testes de laboratório começam com a coleta de amostras, e a coleta de amostras é a mais fácil de ignorar.O mais importante para a coleta de amostras é selecionar o tipo correto de amostra, usar ferramentas de amostragem apropriadas e realizar transporte e processamento razoáveis.

I. Tipo de amostra

Os tipos de amostra comuns são os seguintes:

O método de amostragem pode se referir às especificações técnicas para monitoramento ambiental do novo coronavírus no mercado de comércio agrícola (bazar)”:

1. Amostras de swabs de garganta, mãos, roupas e outros objetos dos profissionais: é necessário usar a solução de preservação do vírus no tubo de amostragem de vírus e infiltrar totalmente os cotonetes de amostragem.A superfície do solo) é repetidamente aplicada e enxaguada por mais de 3 vezes.Ao mesmo tempo, é necessário realizar amostragem distribuída multiponto na superfície do objeto amostrado.

2. Amostras de esfregaço de superfícies de alimentos: As amostras de alimentos não podem ser coletadas diretamente.Os alimentos a serem coletados devem ser separados cuidadosamente e armazenados em um saco de amostragem limpo antes da coleta de amostras de swab.É necessário usar a solução de preservação de vírus no tubo de amostragem de vírus, depois de embeber totalmente o cotonete de amostragem, esfregar e enxaguar repetidamente a superfície da amostra de alimento a ser coletada mais de 3 vezes.Ao mesmo tempo, é necessário realizar amostragem distribuída multiponto na superfície da amostra.

3. Amostras de esgoto: De acordo com a distribuição do sistema de drenagem no mercado, selecione 2-3 locais de amostragem de esgoto, com foco na coleta da rede de tubulação interna, a jusante da direção do fluxo de água ou na conexão com a rede de tubulação municipal.Para coletar uma amostra de swab, mergulhe-a no esgoto com um cotonete de amostragem para que absorva o esgoto e enxágue no tubo de amostragem mais de 3 vezes.Para coletar amostras de esgoto, use garrafas plásticas de polietileno para coletar amostras de água de esgoto de 30-500 mL;para coleta de esgoto com volume superior a 500 mL, podem ser utilizados baldes plásticos de polietileno ou equipamentos especiais de enriquecimento de amostras de água no local.Ao mesmo tempo, é necessário realizar amostragem distribuída multiponto para o local de amostragem de esgoto.

4. Amostras de animais: Para animais vivos, amostras de zaragatoas podem ser usadas para coletar zaragatoas de superfície corporal, zaragatoas orofaríngeas e zaragatoas anais, e amostras de excrementos ou secreções também podem ser coletadas e registradas adequadamente na folha de registro.Para amostras de animais que foram esfolados, etc., use cotonetes para coletar amostras da superfície corporal e da cavidade corporal.É necessário usar a solução de preservação do vírus no tubo de amostragem do vírus para infiltrar totalmente o cotonete de amostragem e, em seguida, repetir a aplicação da superfície da amostra de alimento a ser coletada.Shabu mais de 3 vezes.Ao mesmo tempo, é necessário realizar amostragem distribuída multiponto na superfície da amostra.

5. Outros utensílios: recipientes para transporte e criação de animais, como gaiolas ou tanques de peixes.Primeiro, observe ou entenda os tipos específicos de animais armazenados e criados no recipiente e colete amostras de swab na parede interna do recipiente ou amostras líquidas do conteúdo.

6. Colete amostras de aerossóis em áreas onde as pessoas se reúnem, áreas comerciais mal ventiladas, escritórios e banheiros.

II. Ferramentas de amostragem
1. Tubo de coleta de sangue
Se você precisar fazer testes de ácido nucleico e amostras de anticoagulante posteriormente, é recomendável usar um vaso sanguíneo a vácuo contendo anticoagulante EDTA para coletar sangue;para amostras de soro, recomenda-se usar um vaso sanguíneo a vácuo sem anticoagulante.

2. Cotonete de amostragem

Recomenda-se o uso de zaragatoas de polipropileno em vez de zaragatoas de alginato de cálcio ou zaragatoas com varas de madeira, porque podem conter substâncias que inativam determinados vírus e inibem o teste de PCR.Swabs com cabeças de algodão não podem ser usados, porque as fibras de algodão têm uma forte adsorção de proteínas e não são facilmente eluídas na solução de preservação subsequente.

Nas “Especificações Técnicas para Coleta Mista 10 em 1 e Detecção de Novos Ácidos Nucleicos de Coronavírus”, está claramente estipulado que “o swab de amostragem deve ser feito de poliéster, náilon e outros materiais não-algodão e não-alginato de cálcio, e o cabo deve ser feito de material não-madeira.O ponto de ruptura fica a cerca de 3 cm do topo da cabeça do cotonete, o que é fácil de quebrar.”

O CDC nos Estados Unidos também mencionou “Use apenas cotonetes de fibra sintética com hastes de plástico ou arame.Não use zaragatoas de alginato de cálcio ou zaragatoas com hastes de madeira,pois podem conter substâncias que inativam alguns vírus e inibem o teste de PCR.

Atualmente amplamente utilizado é um swab flocado de náilon estéril descartável combinado com uma haste de plástico.O cotonete flocado tem melhor absorção de água e taxa de liberação.De acordo com os diferentes locais de amostragem, a cabeça do swab também possui tamanhos e fibras diferentes.A espessura.”

3. Solução de preservação para transporte de amostras

Solução de preservação de inativação de vírus: uma quantidade apropriada de concentração de sal de guanidina e uma variedade de componentes de lise viral podem lisar diretamente o vírus para liberar ácido nucleico, inativar RNase e DNase e garantir a integridade do ácido nucleico, que pode ser usado para detecção subsequente de qPCR.Não pode ser usado para cultivo e isolamento de vírus.

Solução de transporte e preservação de vírus: contém sais, aminoácidos, vitaminas, glicose e proteínas necessárias para a sobrevivência do vírus, que podem manter a atividade do vírus.Ele pode ser usado para extração de ácido nucléico e detecção do vírus no futuro, e também pode ser usado para o cultivo e separação do vírus.

4. Tubo de preservação de amostra e saco de amostra

O tubo de armazenamento da amostra deve ser um tubo de plástico estéril com uma tampa de rosca que não adsorve o ácido nucleico.Cada tubo de amostra deve ser coberto com um saco de amostra para evitar vazamento e contaminação da amostra.

III.Substâncias interferentes na amostra

Substâncias interferentes em experimentos de PCR

1. interferente endógeno

As substâncias presentes na amostra corporal podem interferir na detecção de outras substâncias.

Sangue:heme (>1mg/ml), hemina (>0,1ng/μl), triglicerídeos, IgG, etc.;

Urina:Ureia (20mM);

Banco:polissacarídeos vegetais, colato;

Tecido:protease, colágeno;

Leite: protease, ião cálcio;

Drogas: antibióticos, antivirais, hormônios, etc.

outro.

2. interferente exógeno

Provém de substâncias que podem interferir na detecção de outras substâncias in vitro.Aditivos e substâncias de amostra que podem ser contatados durante a coleta e processamento de amostras:

Suprimentos de teste: gel de separação de soro, recipiente de coleta de amostra e rolha de borracha, cateter, fluido de lavagem de cateter, pó de luva, etc.

Anticoagulante: heparina (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), etc.;

Solventes orgânicos: isopropanol (>0,1 UI/ml), betaína, dimetilsulfóxido, formamida, glicerina, PEG, etc.;

Desinfetantes: álcoois (etanol>1%), aldeídos, fenóis (fenol>0,2%), peróxidos, ácidos fortes (HCL), álcalis fortes (NaOH), etc.;

Detergente:SDS (>0,005%);

Solo: Húmus

Corante: índigo

outro.

Sob condições reais de amostragem ao ar livre, como a coleta de amostras ambientais, as amostras podem conter uma variedade de substâncias interferentes, e a composição das substâncias interferentes em cada local é diferente, o que exige que experimentos de interferência de PCR sejam realizados de acordo com as condições locais.

4.Condições de armazenamento e transporte de amostras

Amostras clínicas recém-colhidas devem ser enviadas ao laboratório dentro de 2 a 4 horas após a coleta a 2°C a 8°C.Armazene a 4℃ em 24h.As amostras usadas para isolamento de vírus e detecção de ácido nucleico devem ser testadas o mais rápido possível.As amostras que podem ser testadas em 24 horas podem ser armazenadas a 4°C;as amostras que não puderem ser detectadas dentro de 24 horas devem ser armazenadas a -70°C ou menos (se não - Armazenar a 70°C no refrigerador a -20°C).

Resumo:A coleta, transporte e armazenamento padronizados de amostras são essenciais para os testes subsequentes.Os falsos negativos de muitos exames laboratoriais são causados ​​pela coleta, transporte e armazenamento inadequados de amostras que levam à degradação do ácido nucléico viral.No entanto, muitos laboratórios ainda ignoram a importância da amostragem.Espero que este artigo possa despertar a atenção de todos para a amostragem e tornar a amostragem mais científica e razoável!

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