quanto você sabe

Sobre Nextração de ácido ucleico

O início e o fim do ácido nucleico purificado

Tudo é difícil no começo, o ácido nucléico purificado é o mais

Iniciação de experimentos moleculares, para experimentos subsequentes

O sucesso ou o fracasso tem um impacto crucial.

O espectrofotômetro UV de rastreamento/ultratraço é preferido por muitos pesquisadores científicos porque pode detectar a concentração de ácido nucleico e resíduos de íons de proteína e sal de maneira simples, rápida e econômica.

Como todos sabemos, A260 significa valor OD de absorção de ácido nucleico, A280 significa valor OD de absorção de concentração de proteína, A230 significa valor OD de absorção de concentração de íons de sal, então A260 pode converter concentração de ácido nucleico, A260/280 significa resíduo de proteína, A260/230 significa resíduo de íons de sal, mas esta é apenas uma regra descoberta por pesquisadores com base em um grande número de resultados de medição, e é "convencional” para acreditar que pode explicar a pureza do DNA e do RNA paraAté certo ponto.Não é o único padrão para a identificação do rendimento e pureza do ácido nucléico, é usado apenas como referência e não é um “padrão ouro”.

O manual Thermo Fisher ND-2000 enfatiza a confiabilidade dos resultados do teste

A razão é que os resultados obtidos usando um espectrofotômetro UV micro/ultramicro refletem apenas o rendimento e a pureza do ácido nucleico do lado, e há muitos fatores de influência (caminho óptico, volume da amostra, concentração da amostra, valor de pH, outros íons que afetam a medição de absorção, etc.), o valor OD medido não é necessariamente preciso.Ao mesmo tempo, devido à falta de especificidade do material de determinação do valor de absorção, DNA de fita simples, DNA de fita dupla, RNA, dNTPs e algumas proteínas têm picos de absorção no comprimento de onda de 260 nm, e a concentração determinada apenas por A260 não é necessariamente o DNA ou RNA real.A concentração e sua integridade e degradação não podem ser julgadas.

Então, como julgar a qualidade do nosso ácido nucleico purificado?Além de usar um espectrofotômetro UV micro/ultramicro para detecção, métodos como a eletroforese em gel de agarose também são necessários para exibir visualmente a pureza e a integridade do ácido nucleico e para indicar a concentração até certo ponto.Desta forma, o rendimento de ácido nucleico e a pureza obtidos a partir dos resultados de detecção de vários métodos são credíveis.

Comparação de gráficos experimentais

O DNA genômico das células H1299 foi extraído usando os kits de extração de DNA da empresa A, e foi observada contaminação significativa por impurezas, resultando em altos valores de OD

(Valor de medição de DO e eletroferograma correspondente)

índice de avaliação

Existe um “padrão ouro” para o rendimento do ácido nucleico e testes de qualidade?

Até onde sabemos, não existe um método simples, rápido e barato.Quer se trate de espectrofotômetro, eletroforese em gel ou espectrometria de massa, todos eles refletem a concentração e a pureza do ácido nucleico na solução de diferentes aspectos e precisam ser julgados referindo-se uns aos outros.

O melhor índice de avaliação é sempreo aplicativo experimental de acompanhamento.Não afeta a eficiência da transcrição reversa e da amplificação por PCR.A obtenção de produtos de amplificação confiáveis ​​e valores de Ct, e a obtenção de uma sequência completa por sequenciamento é uma extração de ácido nucleico bem-sucedida.

Resumindo, a visão da teoria somente da proporção deve ser desafiada pela visão de “usar bons resultados experimentais a jusante como bons parâmetros de extração”!

Kits de extração de DNA e RNA Foregene recomendados para obter alta pureza de DNA/RNA:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/