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ARN longo não codificante, o lncRNA é um ARN não codificante com um comprimento superior a 200 nucleótidos, geralmente entre 200-100000 nt.O lncRNA regula a expressão gênica nos níveis epigenético, transcricional e pós-transcricional e participa do silenciamento do cromossomo X, imprinting do genoma e modificação da cromatina, ativação da transcrição, interferência da transcrição, transporte nuclear, regulação do ciclo celular, regulação da diferenciação celular e efeitos de compensação de dose (efeito de compensação de dosagem) e muitos outros processos importantes de regulação estão intimamente relacionados à ocorrência, desenvolvimento e prevenção de doenças humanas e são atualmente um dos pontos quentes no campo da biomedicina.

01  Tipos e características de LncRNA

O lncRNA é dividido em vários tipos de acordo com as diferentes fontes de sua formação, como mostrado na figura acima.Tem as seguintes características:

1. Os lncRNAs são geralmente mais longos, com expressão dinâmica e diferentes métodos de splicing durante a diferenciação
2. Em comparação com os genes codificadores, o lncRNA geralmente tem um nível de expressão mais baixo
3. A maioria dos lncRNAs tem especificidade de expressão temporal e espacial óbvia no processo de diferenciação e desenvolvimento de tecidos
4. Existem expressões características em tumores e outras doenças
5. As localizações subcelulares do lncRNA são diversas
6. A sequência é baixa em conservação, mas a função tem um certo grau de conservação, etc.

02 Perguntas frequentes sobre a transcrição reversa do LncRNA

Devido ao baixo conteúdo de lncRNA nas células, comprimento longo e estrutura de alto nível, esse RNA geralmente possui estruturas complexas, como hastes ou grampos de cabelo, e o RT-qPCR é propenso a problemas de transcrição reversa malsucedida ou baixa eficiência.

03 Solução de transcrição reversa LncRNA

Na regra central, o processo de vírus de RNA usando sua própria transcriptase reversa para sintetizar DNA usando RNA como modelo é chamado de transcrição reversa.O processo de usar a transcriptase reversa do vírus de RNA para sintetizar o modelo de cDNA in vitro é chamado de transcrição reversa.Os principais elementos incluídos no sistema de transcrição reversa: molde de RNA, transcriptase reversa, primers e outros componentes.

1.modelo de RNA

A influência do molde de RNA na transcrição reversa é refletida em sua estrutura, pureza e integridade.Quanto maior a pureza e integridade do RNA extraído, maior a eficiência da transcrição reversa e mais precisos os resultados quantitativos subsequentes.O RNA purificado por reagentes de extração de RNA comumente usados ​​geralmente contém resíduos de álcool e sais de guanidina, que têm um forte efeito inibitório na maioria das transcriptases reversas.

2.Transcriptase reversa

A transcriptase reversa tem uma influência chave em todo o sistema de transcrição reversa.A temperatura adequada para a transcriptase reversa usada na maioria dos laboratórios é geralmente de 42°C.De fato, a abertura da estrutura de alto nível do RNA requer uma temperatura mais alta, e os requisitos para a transcriptase reversa são maiores.

3.cartilha

Os primers de transcrição reversa incluem primers específicos de gene, primers aleatórios e primers Oligo dT.A maioria dos lncRNAs não contém caudas poliA, e é importante combinar adequadamente os primers aleatórios com Oligo dT.

4. Outros componentes

Tendo em vista que o RNA é particularmente fácil de degradar, a introdução de componentes no sistema de transcrição reversa pode ser minimizada, o que pode impedir efetivamente a entrada de RNase e garantir o bom andamento da transcrição reversa.

Foregeneobtém do modelo de RNA, transcrição reversa para qPCR

Acompanhe de forma abrangente sua detecção de lncRNA

Animal Total RNA IisolamentoKit (com coluna de remoção de gDNA)

RNA Total da Célula IisolamentoKit (com coluna de remoção de gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Com gDNase)(Super Premix para síntese de cDNA de primeira cadeia a partir de lncRNA)

PCR em tempo real EasyTM-SYBR Green I

Avantagens ofextração de RNA:

O kit usa a tecnologia de extração de RNA de terceira geração, sem necessidade de usar DNase.

11 minutos de células cultivadas em placas de 96, 24, 12 e 6 poços, extração de alta eficiência de RNA celular total de alta qualidade, livre de gDNA e de alta pureza.

Vantagens da transcrição reversa do lncRNA:

Um sistema de transcrição reversa especialmente desenvolvido para LncRNA para remover rapidamente a contaminação do DNA genômico.

O sistema de transcrição reversa tem alta estabilidade térmica e ainda apresenta bom desempenho de transcrição reversa a 50°C.

Modelos com alto conteúdo de GC e estrutura secundária complexa podem ser revertidos com alta eficiência.

Vantagensof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase tem maior eficiência de amplificação, maior sensibilidade de amplificação e maior especificidade de amplificação

O Real PCR Easy Mix otimizado faz com que o SYBR Green I tenha maior sensibilidade de detecção e sua intensidade de fluorescência é 3-5 vezes maior que a de produtos similares, o que pode atender às necessidades de diferentes tipos de experimentos quantitativos de fluorescência.