A enzima Taq de arranque a quente é amplamente utilizada.Em comparação com a DNA polimerase comum, a enzima Taq de início rápido pode efetivamente evitar alguma amplificação não específica e a formação de dímeros de primer, e pode efetivamente melhorar a taxa de sucesso da amplificação do gene alvo.Especialmente no campo de testes genéticos, a enzima Taq hot-start foi identificada como um padrão obrigatório na indústria, e a DNA polimerase comum não deve ser usada.Como pode ser visto acima, as enzimas Taq de arranque a quente são amplamente utilizadas.Atualmente, existem muitas marcas de enzimas Taq hot-start no mercado doméstico, mas não existem muitas enzimas Taq hot-start com alta qualidade.Diante de tantos produtos enzimáticos Taq de início rápido, como devemos escolher?

1. Selecione a enzima Taq hot-start com alta eficiência de amplificação

A eficiência da amplificação por PCR está intimamente relacionada ao desempenho da enzima Taq.Depois que um bom sistema de reação enzimática Taq é otimizado, a eficiência de amplificação é superior a 95% e a faixa de amplificação da quantidade inicial do modelo é ampla.A amplificação satisfatória pode ser obtida quando o conteúdo do gene alvo é baixo, e não é fácil ser envenenado quando a quantidade do modelo é alta e o período de amplificação exponencial é longo.Para a enzima Taq com baixo desempenho, mesmo que o sistema de reação tenha sido otimizado várias vezes, a eficiência de amplificação ainda é inferior a 90%, a forma “S” da curva de amplificação não é óbvia, a inclinação é pequena e a curva é plana.Quando a quantidade de template é baixa, não pode ser amplificada, e quando a quantidade de template é alta, o efeito de amplificação não é ideal.Portanto, a seleção de DNA polimerases com alta eficiência de amplificação é crucial para o sucesso da PCR e qPCR.

2. Selecione a enzima Taq hot-start com forte poder enzimático

O poder enzimático da enzima Taq está relacionado com a eficiência de amplificação.Geralmente, quanto mais forte for o poder enzimático da enzima Taq hot-start, mais longo será o período de crescimento exponencial da amplificação por PCR, a curva em forma de S mais típica, maior o valor do sinal de fluorescência e mais adequado para detecção de PCR multiplex.As DNA polimerases de marca com poder enzimático fraco geralmente podem suportar apenas reações 2-plex.Ao fazer reações 3-plex, a curva de amplificação é baixa, o valor do sinal de fluorescência é baixo e não há curva de amplificação típica, portanto, os resultados são difíceis de julgar.

3. Selecione uma enzima Taq hot-start com alta sensibilidade

De um modo geral, a DNA polimerase tem alta eficiência de amplificação e alta sensibilidade, mas também há inconsistências.Se a abundância do gene alvo da amostra a ser amplificada for baixa, recomenda-se testar a sensibilidade de amplificação da enzima Taq.O método de detecção mais comum é realizar uma diluição gradiente de 10 ou 5 vezes do fragmento de plasmídeo do gene alvo, realizar a detecção por PCR na diluição mais baixa e selecionar a enzima Taq hot-start com maior sensibilidade de detecção.

Pode-se ver pelo exposto que os pesquisadores precisam escolher de acordo com seus próprios requisitos experimentais e condições de financiamento.É melhor fazer um experimento de amplificação de diluição gradiente para detectar a eficiência de amplificação e a sensibilidade da enzima Taq hot-start.

Um exemplo de Foregene's Taq DNA Polimerase:

Foreasy HS Taq DNA Polimerase

Descrição

Foreasy HS Taq DNA Polymerase é uma DNA polimerase expressa em bactérias de engenharia Escherichia coli por tecnologia de recombinação de genes.A enzima é combinada com um tampão de reação exclusivo, o que torna o produto altamente resistente e compatível, e pode usar diretamente o lisado da amostra (Foregene Lysis system) como modelo para reações de detecção.

Aplicativo

PCR qualitativo e PCR quantitativo para detecção de templates purificados e não purificados.

Controle de qualidade

1. Nenhuma atividade de nuclease exógena detectada

2.Método de PCR para detectar DNA genômico residual sem hospedeiro

3. Pode amplificar com eficácia genes de cópia única no genoma humano

4. Armazene em temperatura ambiente por uma semana, sem mudanças óbvias de atividade

Detalhes do produto: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/