Sistema SOP de construção

Estabeleça o SOP do experimento de PCR para padronizar o comportamento do pessoal do experimento.

Os experimentadores cumprem estritamente os procedimentos operacionais e minimizam a poluição do PCR que pode ser causada por fatores humanos ou evitam a ocorrência de poluição na operação.Além disso, o experimentador deve ter os conhecimentos e habilidades profissionais correspondentes, incluindo proficiência em operar equipamentos relacionados, esclarecer todo o processo de trabalho, dominar os métodos de tratamento de contaminação e métodos de controle de qualidade laboratorial e ser capaz de interpretar corretamente os resultados dos testes.

Construindo Laboratório Padrão de PCR

O laboratório de PCR está dividido, em princípio, em quatro áreas, nomeadamente área de preparação de reagentes, área de processamento de amostras, área de amplificação e área de análise de produtos de amplificação.As duas primeiras áreas são áreas de pré-amplificação e as duas últimas áreas são áreas de pós-amplificação.A zona de pré-amplificação e a zona de pós-amplificação devem ser estritamente separadas.Materiais experimentais, reagentes, papel de registro, canetas, materiais de limpeza, etc. só podem fluir da área de pré-amplificação para a área de pós-amplificação, ou seja, da área de preparação de reagentes, área de processamento de amostras, área de amplificação e área de análise de produtos de amplificação, e não devem fluir na direção inversa.O fluxo de ar no laboratório também deve fluir da área de pré-amplificação para a área de pós-amplificação, não na direção inversa.

Reduzir etapas experimentais

Se o laboratório realizar apenas detecção e identificação por PCR, recomenda-se usar PCR quantitativo fluorescente em vez de PCR convencional.

Os resultados da detecção de PCR quantitativo de fluorescência podem ser coletados e analisados ​​por sinais fluorescentes, portanto, não há necessidade de abrir a tampa para eletroforese após a reação, o que evita a contaminação de produtos de PCR causada pelo vazamento de produtos de reação para formar aerossóis.Se você aumentar o número de aberturas da tampa durante a etapa de carregamento da eletroforese em gel, é provável que ocorra contaminação por aerossol.Recomenda-se promover a aplicação de PCR quantitativo e substituir gradualmente o PCR qualitativo.

Adote o sistema antipoluição da UNG

O sistema de contaminação do produto anti-PCR UNG é usado para a reação de PCR.

O sistema usa dUTP em vez de dTTP.Após a reação de PCR, todos os produtos de PCR (fragmentos de DNA) são incorporados com dUTP;na próxima rodada da reação de PCR, a enzima UNG adicionada ao sistema é incubada a 37°C por 5 minutos antes da PCR, que pode ser específica Degradar todos os fragmentos de DNA contendo dUTP e, em seguida, realizar a reação de PCR.Isso pode remover completamente a contaminação por aerossol causada por produtos de PCR.O efeito é mostrado na figura abaixo:

Nota: Para a série de PCR direto, você pode escolher os produtos da série do sistema de poluição de produtos anti-PCR da FJ Biotech

sugerir

Para laboratórios que conduzem testes de genotipagem em larga escala, é altamente recomendável usar o sistema de contaminação de produto anti-PCR UNG para testar reagentes, além da construção de laboratórios razoáveis.

Lembrete: O uso deste sistema não pode remover a contaminação do produto de PCR que já foi causada.Portanto, o sistema UNG deve ser usado no início do teste relevante, e o sistema UNG sempre deve ser usado para amplificação por PCR, a fim de evitar a contaminação dos produtos de PCR.Falso positivo.

Recomenda-se usar o sistema Direct PCR-UNG da Forge Biotech ao realizar testes em larga escala, como:Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Kit de PCR Direto de Sementes de Plantas-UNG;

Kit de PCR Direto de Tecido Animal-UNG;

Kit de PCR direto para cauda de camundongo-UNG;

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG。

Esta série de kits da Foregene pode não apenas realizar a detecção de PCR rapidamente e em grande escala, mas também prevenir e controlar efetivamente a contaminação do produto de PCR.