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Estabeleça o SOP do experimento de PCR para padronizar o comportamento do pessoal do experimento.

4.1

O experimentador cumpre estritamente os procedimentos operacionais e minimiza a poluição do PCR que pode ser causada por fatores humanos ou evita a ocorrência de poluição.Além disso, o experimentador deve ter os conhecimentos e habilidades profissionais correspondentes, incluindo proficiência em operar equipamentos relacionados, esclarecer todo o processo de trabalho, dominar os métodos de tratamento de contaminação e métodos de controle de qualidade laboratorial e ser capaz de interpretar corretamente os resultados dos testes.

Estabeleça um laboratório de PCR padrão.

4.2

O laboratório de PCR é dividido em quatro áreas em princípio, ou seja, área de preparação de reagentes, área de processamento de amostras, área de amplificação e área de análise de produto de amplificação.As duas primeiras áreas são áreas de pré-amplificação e as duas últimas áreas são áreas de pós-amplificação.A zona de pré-amplificação e a zona de pós-amplificação devem ser estritamente separadas.Materiais experimentais, reagentes, papel de registro, canetas, materiais de limpeza, etc., só podem fluir da área de pré-amplificação para a área de pós-amplificação, ou seja, da área de preparação de reagentes → área de processamento de amostras → área de amplificação → área de análise de produtos de amplificação, e não devem fluir para trás.O fluxo de ar no laboratório também deve fluir da área de pré-amplificação para a área de pós-amplificação e não fluir para trás.O projeto de laboratório de PCR ideal é mostrado abaixo:

4.3

Figura A: Modo de configuração de laboratório de PCR ideal com pressão negativa na sala de buffer

4.4

Figura B: Modo de configuração de laboratório de PCR ideal com pressão positiva na sala de buffer

Os diagramas de configuração do laboratório de PCR fornecidos na Figura A e na Figura B devem ser um modo de configuração mais ideal, e o laboratório com condições pode consultar este modo para design.Para laboratórios comuns, recomenda-se que a área de amplificação de PCR e a área de análise do produto possam ser separadas, e a abertura da tampa deve ser reduzida ao máximo na área de preparação de amostras e na área de amplificação de PCR.Lembre-se: Produtos e suprimentos experimentais na área de análise de produtos são estritamente proibidos de serem levados para a área de preparação de amostras e área de amplificação de PCR.

4.5

Se o laboratório realizar apenas detecção e identificação por PCR, recomenda-se usar PCR quantitativo fluorescente em vez de PCR convencional.

Os resultados da detecção de PCR quantitativo de fluorescência podem ser coletados e analisados ​​por sinais de fluorescência, portanto, não há necessidade de abrir a tampa para eletroforese após a reação, o que evita a contaminação do produto de PCR causada pelo vazamento de produtos de reação para formar aerossóis.Se você aumentar o número de aberturas da tampa durante a etapa de carregamento da eletroforese em gel, é provável que ocorra contaminação por aerossol.Recomenda-se promover a aplicação de PCR quantitativo e substituir gradualmente o PCR qualitativo.

O sistema de contaminação do produto anti-PCR UNG é usado para a reação de PCR.

O sistema usa dUTP em vez de dTTP.Após a reação de PCR, todos os produtos de PCR (fragmentos de DNA) são incorporados com dUTP;na próxima rodada da reação de PCR, a enzima UNG adicionada ao sistema é incubada a 37°C por 5 minutos antes da PCR, que pode degradar especificamente todos os fragmentos de DNA contendo dUTP e, em seguida, realizar a reação de PCR.Isso pode remover completamente a contaminação por aerossol causada por produtos de PCR.O efeito é mostrado na figura abaixo:

4.6

Nota: Para a série de PCR direto, você pode escolher os produtos da série do sistema de contaminação de produtos anti-PCR da Foregenesugerir

Para laboratórios que conduzem testes de genotipagem em larga escala, é altamente recomendável usar o sistema de contaminação de produto anti-PCR UNG para testar reagentes, além da construção de laboratórios razoáveis.

Lembrete: O uso deste sistema não pode remover a contaminação do produto de PCR que já foi causada.Portanto, o sistema UNG deve ser usado no início do teste relevante e o sistema UNG deve ser usado para amplificação por PCR, a fim de evitar a contaminação de produtos de PCR Falso positivo.

Recomenda-se usar o sistema Direct PCR-UNG da Foregene ao realizar testes em larga escala, como:

Kit de PCR direto de folha de planta-UNG;

Kit de PCR Direto de Sementes de Plantas-UNG;

Kit de PCR Direto de Tecido Animal-UNG;

Kit de PCR direto para cauda de camundongo-UNG;

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG。

Esta série de kits da Foregenepode não apenas realizar a detecção de PCR rapidamente e em grande escala, mas também prevenir e controlar efetivamente a contaminação do produto de PCR.


Horário da postagem: 19 de março de 2021