1: Substitua os suprimentos experimentais a tempo

Configure o controle negativo (NTC) e repita-o várias vezes.Assim que for constatado que há contaminação do produto de PCR no laboratório, substitua todos os suprimentos experimentais a tempo.Tais como: rediluir e preparar os primers, reesterilizar a ponta da pipeta, tubo EP, ddH2O, etc., substituir por uma nova pipeta e emprestar temporariamente outros laboratórios para realizar experimentos de PCR.O laboratório contaminado deve ser ventilado e irradiado com raios ultravioleta até que a contaminação do produto de PCR seja eliminada antes de prosseguir com o experimento.

2: Estender o tempo de exposição aos raios UV

Vale a pena notar que, para remover a contaminação do DNA, a radiação ultravioleta regular deve ser estendida por 2 horas do que o normal.Mesmo assim, o efeito da irradiação UV na remoção de pequenos fragmentos (abaixo de 200bp) da contaminação do DNA ainda não é bom.

O comprimento de onda ultravioleta (nm) é geralmente 254/300nm, e é suficiente para irradiar por 30 minutos.Deve-se notar que ao escolher UV para eliminar a contaminação de produtos residuais de PCR, o comprimento do produto de PCR e a distribuição de bases na sequência do produto devem ser considerados.A irradiação UV só é eficaz para fragmentos longos acima de 500 pb e tem pouco efeito em fragmentos curtos.

Durante a irradiação UV, as bases de pirimidina no produto de PCR irão formar dímeros.Esses dímeros podem terminar a extensão, mas nem todas as pirimidinas na cadeia de DNA podem formar dímeros, e a irradiação UV também pode quebrar os dímeros..O grau de formação do dímero depende do comprimento de onda UV, do tipo de dímero de pirimidina e da sequência de nucleotídeos adjacentes ao local do dímero.Portanto, se os fragmentos amplificados por PCR forem pequenos, recomenda-se usar o sistema de contaminação de produto anti-PCR UNG.

3：Limpadores de poluição de DNA comumente usados

Os aerossóis são facilmente gerados quando as pipetas são adicionadas, o que é difícil de evitar e se assentará rapidamente.Portanto, é sem dúvida uma boa escolha usar frequentemente removedores de poluição de DNA especiais para evitar a propagação da poluição de DNA.

4: Use o sistema antipoluição UNG

Após a remoção da contaminação do produto de PCR, o laboratório de teste pode usar o sistema de contaminação de produto anti-PCR UNG para evitar a contaminação do produto de PCR.Em laboratórios gerais, você pode realizar partições experimentais simples, separar rigorosamente a área do produto de PCR de outras áreas, estabelecer certas regras e regulamentos de laboratório e realizar treinamento relevante para evitar a ocorrência de contaminação do produto de PCR.

Recomendações: Estabelecer um laboratório de PCR razoável, manter um bom ambiente de PCR, formular procedimentos operacionais de PCR padrão e cultivar a consciência operacional rigorosa dos experimentadores são as chaves para prevenir ou reduzir a poluição dos experimentos de PCR.