A seguinte análise de possíveis problemas emBucalcotonete/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

A coluna de purificação está entupida

Neste kit, na operação de extração de DNA genômico, a coluna de purificação é adsorvida diretamente na mistura de lise enzimática da amostra sem etapa de centrifugação, e a coluna de purificação pode ser bloqueada devido à enzimização incompleta e alta viscosidade da amostra.

As seguintes causas possíveis são as seguintes:

1. Digestão enzimática incompleta de amostras de tecido.

Recomendação: O tempo de processamento da amostra de Foregene Protease pode ser adequadamente estendido ou o sobrenadante pode ser coletado após centrifugação a 12.000 rpm (~13.400× g) por 5 minutos.

2. Uso excessivo de amostras de tecido ou tecidos grandes.

Recomendação: É melhor não ultrapassar 1Bucal swab na amostra;se a amostra for muito grande, aumente a dosagem de Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 de acordo.

3. A viscosidade da amostra é muito alta.

Recomendação: As amostras podem ser adequadamente diluídas com 10 mM de Tris-HCl antes da extração do DNA genômico.

4. Fragmentos do cartão de sangue foram sugados.

Recomendação: O tempo de centrifugação transiente da etapa 6 da extração genômica da mancha de sangue (Cartão FTA) pode ser adequadamente estendido.

Baixo rendimento ou nenhum DNA

Muitas vezes, há uma variedade de fatores que afetam o rendimento do DNA genômico, incluindo origem da amostra, condições de armazenamento da amostra, preparação da amostra, manipulação, etc.

O DNA genômico não pode ser obtido durante a extração

As possíveis causas são as seguintes:

1. A preservação inadequada das amostras ou o armazenamento por muito tempo leva à degradação do DNA genômico.

Recomendação: As zaragatoas orais devem ser preferencialmente colhidas recentemente e não é aconselhável a utilização de zaragatoas preservadas para operações de extração de ADN genómico;amostras de manchas de sangue devem garantir que a qualidade seja qualificada e o tempo de armazenamento não seja muito longo.

2. O uso insuficiente de tecido pode resultar na não extração do DNA genômico correspondente.

Recomendação: Siga obocal instruções de amostragem de swab no guia de operação e limpe o máximo de vezes possível para que células suficientes possam ser anexadas ao swab oral para extração de DNA genômico;para extração de amostra de sangue, a área de corte do sangue pode ser aumentada adequadamente.

3. Foregene Protease é preservado de forma inadequada, resultando em uma diminuição em sua atividade ou inativação.

Recomendação: Confirme as condições de armazenamento deo Foregene Protease ou substitua-o por um novo Foregene Protease para reação enzimática.

4. A preservação inadequada do kit ou o tempo de armazenamento é muito longo, resultando na falha de alguns componentes do kit.

Recomendação: Compre um novoBucal cotonete DNAisolamento kit para procedimentos relacionados.

5. Buffer WB não adiciona etanol absoluto.

Recomendação: Confirme se o tampão WB adiciona o volume correto de etanol absoluto.

6. O eluente não foi adicionado corretamente ao filme de silicone.

Recomendação: Adicionar 65°Co eluente pré-aquecido cai no meio da membrana de silicone e deixe em temperatura ambiente por 5 min para aumentar a eficiência da eluição.

LDNA genômico de baixo rendimento isolado

As seguintes causas possíveis são as seguintes:

1. A preservação inadequada das amostras ou o armazenamento por muito tempo leva à degradação do DNA genômico.

Recomendação: As zaragatoas orais são preferencialmente colhidas recentemente e as zaragatoas preservadas não devem ser utilizadas para extração de ADN genómico.

2. Se a quantidade de amostra de tecido for muito pequena, o conteúdo de DNA genômico extraído será menor.

Recomendação: Siga as instruções de amostragem de swab oral no guia de operação, limpando o máximo de vezes possível para que células suficientes possam ser anexadas ao swab oral para extração de DNA genômico.

3. Foregene Protease é preservado de forma inadequada, resultando em uma diminuição em sua atividade ou inativação.

Recomendação: Confirme as condições de armazenamento dethe Foregene Protease ou substituí-lo por um novo Foregene Protease para reação enzimática.

4. Problemas com eluentes.

Recomendação: Utilizar Buffer EB para eluição;se estiver usando ddH₂O ou outros eluentes, confirme se o pH do eluato está entre 7,0-8,5.

5. O eluato não é adicionado gota a gota corretamente.

Recomendação: Adicione gotas de eluente no meio da membrana de silicone e deixe em temperatura ambiente por 5 min para aumentar a eficiência da eluição.

6. O líquido de eluição acumula muito pouco.

Recomendação: Use eluente para eluição de DNA genômico conforme exigido nas instruções, pelo menosnão menos de 15μl.

Lquanta pureza of DNA genômicoisolado

A baixa pureza do DNA genômico pode levar a falhas ou resultados insatisfatórios de experimentos downstream, como: as enzimas não podem ser cortadas, a PCR não pode obter o fragmento do gene de interesse, etc.

As possíveis causas são as seguintes:

1. Poluição por heteroproteína, poluição por RNA.

Análise: A coluna de purificação não foi lavada com Buffer PW;a coluna de purificação Buffer PW Wash não foi lavada usando a velocidade centrífuga correta.

Recomendação: Certifique-se de que não haja precipitação no sobrenadante antes de adicionar etanol;certifique-se de lavar a coluna de purificação de acordo com as instruções, e esta etapa não pode ser omitida.

2. Poluição iônica impureza.

Análise: A coluna de purificação de tampão WB foi omitida ou lavada apenas uma vez, resultando em contaminação iônica residual.

Recomendação: Certifique-se de lavar o Buffer WB 2 vezes conforme indicado para remover os íons residuais tanto quanto possível.

3. Contaminação enzimática de RNA.

Análise: RNases estrangeiras foram adicionadas ao tampão;A operação de lavagem do buffer PW estava incorreta, resultando em resíduos de RNase, afetando as operações experimentais de RNA a jusante, como a transcrição in vitro.

Recomendação: Ácido nucleico da série Foregeneisoladoos kits de nutrição podem remover o RNA sem adição adicional de RNase,por isso Kit de isolamento de DNA para esfregaço bucal/cartão FTAnecessário't adicionar RNase;certifique-se de seguir as instruções para a coluna de purificação de lavagem Buffer PW, e esta etapa não pode ser omitida.

4. Resíduo de etanol.

Análise: Buffer WB não realizou centrifugação em tubo vazio após a lavagem da coluna de purificação.

Recomendação: Execute a operação correta de centrifugação do tubo vazio de acordo com as instruções.

5. Outra poluição impureza.

Análise: Amostras salvas ou amostras especiais não são pré-tratadas.

Recomendação: Pré-trate completamente a amostra conforme as instruções.