W:Irmão, a transcrição reversa está concluída e, finalmente, a última etapa – PCR quantitativo fluorescente!Ei irmão, o que é PCR quantitativo em tempo real?
M:PCR você sempre sabe, certo?
W: Você sabe, PCR é a reação em cadeia da polimerase, e é uma tecnologia que aumenta o DNA!
M:É quase... É um método técnico de amplificar a sequência alvo em mais de um milhão de vezes através de primers específicos, mas isso apenas indica a presença ou ausência da sequência alvo, não podendo determinar a quantidade do molde inicial.PCR quantitativo de fluorescência é um método técnico desenvolvido para resolver este problema.PCR em tempo real e PCR de quantidade (qPCR) geralmente se referem a ele.
W:A diferença da PCR comum está na quantificação da fluorescência?
M:Sim, ou seja, no estágio de extensão de cada ciclo de PCR, a intensidade do sinal de fluorescência é detectada e a quantidade inicial do modelo pode ser calculada de acordo com a alteração da intensidade do sinal.
W:Parece tão complicado!Eu tenho que calcular isso sozinho?
M:Isso requer que você aprenda devagar, é melhor ser capaz de entender o princípio.Agora você pode se concentrar primeiro no valor de CT, que são dados experimentais relativamente intuitivos, e seu tamanho corresponde ao tamanho do valor inicial do modelo.Existem também gráficos como curvas de amplificação e curvas de fusão.Eles têm a palavra final sobre se sua experiência foi bem-sucedida ou não.
W: Ah, irmão.Então eu vou fazer o experimento qPCR!
M:Preste atenção especial para não adicionar modelos à área de reagentes, caso contrário, sua mistura não utilizada será facilmente contaminada!
W: Entendi!

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